小鼠精原干细胞体外培养体系建立与功能鉴定

目的 构建小鼠精原干细胞(SSCs)体外培养体系,并对培养的SSCs进行功能鉴定.方法 采用两步酶法消化小鼠睾丸组织制备单细胞悬液,CD90、CD49f免疫磁珠分选SSCs,采用Senoli细胞共培养方法体外培养SSCs,并将培养的SSCs移植到受体小鼠曲细精管,定期观察移植后SSCs在受体小鼠曲细精管增殖分化情况.结果 本次研究培养的SSCs在体外大量增殖,SSCs标记物检测显示,CD90、CI49f未分化SSCs标记物表达阳性率均＞99％,而CD117分化SSCs标记物表达阳性率＜1％,SSCs转染GFP慢病毒后移植到受体小鼠曲细精管内可以广泛定植并增殖分化,移植后12w在受体小鼠曲细精管内可见GFP+精子细胞.结论 本研究中建立的小鼠SSCs体外培养体系,不仅能够促进SSCs大量增殖,同时保持了其未分化SSCs干细胞特性.