基于GR79EPSPS筛选标记的抗虫抗除草剂表达载体构建及抗性鉴定

虫害和草害是农业生产中两大主要危害.目前,尽管转基因抗虫和抗除草剂作物相继报道和应用,然而我国抗虫抗除草剂复合性状作物培育仍然明显滞后,而且多依靠传统杂交选育的手段,费事费力、周期长.根据苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)Cry1Ac蛋白结合结构域和毒性结构域特征,人工合成杀虫基因cry1Ac-2.5.同时,利用抗除草剂基因GR79 EPSPS替换卡那霉素筛选标记,构建基于草甘膦除草剂筛选标记的复合抗虫抗除草剂植物表达载体,并转化烟草.qRT-PCR结果表明转基因烟草cry1Ac-2.5和GR79EPSPS基因转录水平均成功表达,经Bt和GR79试纸条检测表明上述基因在蛋白水平正确翻译.抗性实验表明,转基因烟草愈伤经草甘膦筛选,阳性率达到80％,且转基因烟草耐受100 mg/L草甘膦处理.抗虫实验表明,饲喂cry1Ac-2.5转基因烟草4d后,棉铃虫幼虫死亡率为90％左右,表明人工基因cry1Ac-2.5具有显著的的抗虫效果.以上结果表明,构建的抗虫抗除草剂植物表达载体(Cry1Ac-2.5+GR79 EPSPS)将抗虫基因和抗除草剂基因有效合并,对于快速培育抗虫抗除草剂作物具有指导意义.