TaqMan荧光定量RT-PCR快速检测腹地病毒方法的建立

为建立特异、快速、灵敏的TaqMan荧光定量RT-PCR方法用于腹地病毒核酸检测,利用腹地病毒核衣壳蛋白编码基因的特异性序列设计引物和探针,建立荧光定量RT-PCR快速检测体系.对含有目的基因的质粒、80份发热伴血小板减少综合征病毒阳性血清样本以及80份流行性出血热病毒阳性鼠肺样本进行核酸检测,验证方法的灵敏度、特异度和重复性.结果显示,该方法所检测的80份发热伴血小板减少综合征病毒核酸阳性血清与80份流行性出血热病毒阳性鼠肺样本均为阴性,对目的基因的检测灵敏度达50拷贝/反应;重复性测试中的变异系数为0.09％-0.87％,从样本核酸提取至检测完成的全过程仅需2h.证明建立的腹地病毒TaqMan实时荧光RT-PCR方法具有快速、特异、灵敏及重复性好的特点,有助于进口货物中昆虫、啮齿类动物、外轮上工作的疑似病人检疫以及对腹地病毒流行病学监测工作的开展.