人胱抑素C大肠杆菌表达载体构建及包涵体复性研究
Journal of Huizhou University(2018)
摘要
构建大肠杆菌(E.coli)人胱抑素C基因(cysC)表达载体,并探究包涵体胞外复性方法.方法:将人胱抑素C基因克隆至原核表达载体pET32a上,电击转化至大肠杆菌BL21菌株中.IPTG诱导cysC表达,超声破碎后采用SDS-PAGE电泳检测CysC蛋白表达情况,并应用亲和层析和透析复性方法对CysC蛋白进行纯化和复性.结果:IPTG诱导培养重组菌BL21-cysC,可见沉淀和上清中均有pET32a-cysC蛋白表达,且沉淀中表达量更高.采用镍柱及透析方法对表达产物进行纯化,经SDS-PAGE检测,可见分子量约34kD大小的蛋白条带.Western Blotting检测显示经纯化、复性后的重组CysC蛋白具有一定免疫学活性.结论:本实验成功构建大肠杆菌cysC表达重组工程菌,经纯化、复性得到的重组CysC蛋白具有一定免疫活性.
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