重组人神经生长因子真核表达载体构建及其在毕赤酵母中的表达与纯化

研究构建了重组人神经生长因子(Recombinant human nerve growth factor,rhNGF)的一种真核表达载体,并转化毕赤酵母GS115.在hNGF基因序列基础上对其进行毕赤酵母偏好密码子分析与改造,然后构建重组质粒pPIC9K-hNGF,经PCR、酶切及测序验证后,转化酵母,利用遗传霉素筛选出高效表达rhNGF的重组酵母.表达产物经SDS-PAGE分析,结果见一条与hNGF分子质量15.7kDa相当的条带,蛋白表达量约为52.86％.将表达产物经初步纯化和进一步精提后,纯度超过98％.分别以鼠NGF产品和人NGF标准品为对照,利用TF-1细胞/MTS比色法检测NGF活性,结果表明rhNGF具有良好的生物学活性,其活性和比活性分别为5.0U/mL和253U/mg,高于鼠NGF产品(2.6 U/mL,130U/mg),与hNGF标准品相当(5.0 U/mL,250 U/mg).