内皮祖细胞条件培养基对间充质干细胞向内皮细胞分化的影响

目的 探讨体外小鼠内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)条件培养基(CM)对间充质干细胞(mesen-chymal stem cells,MSCs)向内皮细胞(endothelial cells,ECs)分化的影响.方法 全骨髓贴壁法和差速贴壁法提取培养MSCs和EPCs,流式细胞术检测MSCs和EPCs表面标记物,双荧光染色和体外成管实验对EPCs进行功能鉴定.将MSCs分为0％EPCs-CM组(对照组)、25％EPCs-CM组和50％EPCs-CM组.qRT-PCR检测各组CD31、vWF、eNOS的mRNA表达水平.体外成管实验检测各组细胞的体外成管能力;免疫荧光检测各组MSCs CD31、CD34表达情况;对各组上清中的NO进行检测.结果 流式细胞术结果显示,第3代MSCs高表达Sca-1,低表达CD34、CD11b;EPCs高表达CD34、CD133和VEGFR2,可吞噬Dil-AC-LDL和结合UEA-1.在基质胶上可形成管腔样结构.qRT-PCR显示3周时50％EPCs-CM组CD31、vWF、eNOS表达(2.28±0.25,1.76±0.71,8.27±1.65),较对照组显著升高(P<0.05).50％EPCs-CM组MSCs可体外形成管腔样结构;免疫荧光显示50％EPCs-CM组MSCs CD31和CD34的表达明显高于对照组.对照组细胞与实验组细胞上清液中NO的含量(8.81+3.41,20.93±9.47)μmol/L,差异显著(t=3.96,P<0.05).结论 EPCs-CM能提高MSCs体外成管能力,并促进MSCs向ECs分化.