PMA-qPCR快速检测结核活菌方法的建立

为建立快速鉴别诊断结核活/死菌的方法，本研究应用PMA染料与实时定量PCR技术结合(PMA-qPCR)，以结核标准株16 sRNA基因为靶基因，PMA对样品基因组提取物进行处理，PMA能够与死细胞DNA分子共价交联并抑制DNA分子扩增。结果显示：PMA浓度在3μg/mL，曝光时间大于15 min时，PMA既不影响活菌的的扩增，又能有效抑制死菌的扩增；当PMA浓度大于20μg/mL时，PMA影响活菌DNA的扩增；PMA-qPCR技术能够定量不同比例的结核活/死菌悬液中的活菌。结论：PMA-qPCR技术能够快速准确检测出结核杆菌中的活细胞。