多重RT-PCR方法对人肺炎链球菌菌种、血清型及耐药性的鉴别检测

首先,选择肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,SP)基因LytA、肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)基因P 1、肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae,CP)基因ompA作为目标检测靶点设计引物探针,建立鉴别肺炎链球菌菌种的多重RT-PCR方法.其次,针对肺炎链球菌cps基因座序列,利用MGB-Taq-Man探针的多重RT-PCR方法对肺炎链球菌的血清型进行鉴别检测.最后,针对肺炎链球菌耐药基因ermB、mefA为靶标设计引物探针,采用多重RT-PCR方法对其临床阳性样本的耐药性进行鉴别检测.肺炎链球菌鉴别检测多重RT-PCR方法,线性范围为102～107copies/mL,R2分别为0.999、0.996和0.995,灵敏度可达102copies/mL,与其他病原体无交叉反应.512例临床样本经多重RT-PCR方法鉴别检测,肺炎链球菌189例(189/304,62.17％),肺炎支原体83例(83/304,27.30％),肺炎衣原体32例(32/304,10.53％),与单重FQ-PCR及基因测序法比较无统计学差异(P>0.05).189例肺炎链球菌临床样本,经多重RT-PCR检测,血清分型为:19(19.58％,37/189)、23(15.87％,30/189)、6(13.23％,25/189)、14(6.3％,12/189),其他血清型(22.75％,43/189),其他血清型(22.22％,42/189).肺炎链球菌抗药菌株突变检测为:ermB突变115例(115/189,60.85％),mefA突变56例(56/189,29.63％),两基因共突变15例(15/189,7.94％).