小鼠PD-1胞外段重组蛋白表达及其包涵体复性

Hui JIANG,Qiaozhen KANG,Xiabing HUANG,Chenglong ZHANG,Xin LIU

Journal of Zhengzhou University(Natural Science Edition)（2017）

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摘要

旨在利用原核表达系统制备可溶性的PD-1胞外段(以下简称exPD-1)蛋白.以C57BL/6小鼠脾细胞cDNA为模板,扩增小鼠exPD-1基因,成功构建重组质粒pET-28a-exPD-1,并在E.coli BL21(DE3)中诱导表达.结果显示,小鼠exPD-1重组蛋白大小约为17 kD,以包涵体形式存在.exPD-1包涵体蛋白经8 mol/L尿素变性、Ni-NTA亲和层析后,采用尿素梯度透析法对蛋白进行复性,复性效果不佳,添加氧化/还原型谷胱甘肽复性后,复性率达到50%以上,提高了复性效率.小鼠exPD-1蛋白的成功制备,为进一步研究PD-1的免疫学功能奠定了材料基础.

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关键词

PD-1,prokaryotic expression vector,inclusion body,renaturation

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