槲皮素对脂多糖诱导人脑微血管内皮细胞的作用机制

为研究槲皮素对脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导人脑微血管内皮细胞(Human brain microvas-cular endothelial cell,HBMEC)的作用机制,体外培养HBMEC,用LPS诱导HBMEC造模,将细胞分为正常组、模型组、槲皮素组及依达拉奉组,采用噻唑蓝法检测LPS诱导炎症因子变化的时间和槲皮素对HBMEC增殖能力的影响,用实时定量PCR法检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)mRNA、趋化因子C—C基元配体20(chemokine C—C motif ligand 20,CCL20)mRNA和白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)mRNA的表达,用酶联免疫吸附法检测TNF-α,CCL20和IL-8的含量,用蛋白免疫印迹法检测p-NF-ΚB p65,NF-ΚB p65,p-IKKα和IKKα的蛋白表达.结果发现,与正常组比,1 mg·L-1的LPS组细胞活力明显下降(P<0.01);模型8 h组TNF-αmRNA,CCL20 mRNA,IL-8 mRNA表达显著上升(P<0.01);槲皮素各给药组(12.5,25,50,100,200,400μmol·L-1)细胞活力变化不明显.与模型组相比,200μmol·L-1槲皮素组的模型细胞增殖明显(P<0.01);槲皮素组和依达拉奉组TNF-αmRNA,CCL20 mRNA,IL-8 mRNA表达和TNF-α,CCL20,IL-8的含量显著下降(P<0.05);槲皮素组蛋白数量比n(p-NF-ΚBp65)/n(NF-ΚBp65),n(p-IKKα)/n(IKKα)显著减小(P<0.01),而依达拉奉组n(p-NF-ΚBp65)/n(NF-ΚBp65),n(p-IKKα)/n(IKKα)无明显变化.说明槲皮素具有抑制LPS诱导HBMEC的损伤作用,可能是通过下调IKKα/NF-ΚB p65信号通路减少炎症相关因子TNF-α,CCL20和IL-8的表达.这为槲皮素应用于脑血管病变引起的帕金森病临床防治提供了实验依据.