珊瑚菜ITS序列的PCR扩增与测序分析
Ludong University Journal(Natural Science Edition)（2018）
摘要
为加强珍稀濒危物种珊瑚菜遗传多样性的研究和种质资源的保护工作,本实验对珊瑚菜ITS基因片段的PCR扩增条件进行了优化和产物的测序分析.结果显示:珊瑚菜ITS基因片段的PCR扩增最佳反应体系为Buffer 2.50μL,dNTP 0.50μL,引物ITS1和ITS4各1.00μL,Taq DNA polymerase 0.15μL,模板DNA 2.00μL,ddH2 O 17.85μL,总体积25.00μL.最佳扩增程序为94℃ 预变性5.0 min,94℃ 变性50 s,50℃ 退火50 s,72℃ 延伸1 min 45 s,37个循环,后72℃ 延伸10 min.在最佳扩增条件下获得了清晰、稳定的目的条带,测序后获得长度为628 bp的核苷酸序列,通过GenBank的BLAST比对验证,确定为ITS序列,其中包括完整的ITS1序列和5.8S rDNA序列以及ITS2的部分序列.
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