刺参神经肽S受体基因的克隆及表达

研究采用RACE(rapid-amplification of cDNA ends)技术克隆得到刺参NPSR(Apostichopus japonicus Neuropep-tide S Receptor-like,AjNPSR-like)的cDNA序列全长,利用生物信息学和细胞生物学研究方法,对预测的AjNPSR-like蛋白结构特点进行分析和验证,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测了刺参各组织及夏眠阶段中NPSR基因的表达特征.结果显示,AjNPSR-like的cDNA序列全长2498 bp,编码423个氨基酸;其编码蛋白属于G蛋白偶联受体家族;同源性分析显示AjNPSR-like与紫海胆NPS/CCAP-type(CCAP:crustacean cardioactive peptide)受体的相似性最高,为47％;激光共聚焦显微镜观察发现,AjNPSR-like-EGFP蛋白定位在细胞膜上,符合跨膜区结构预测结果;qRT-PCR结果显示,AjNPSR-like在刺参各组织器官中广泛分布,且在夏眠期间表达量均显著上升,推测其与刺参夏眠期间停止摄食及代谢减退有关.本研究结果可以为进一步探究刺参AjNPSR-like在夏眠调控中的作用机理提供一定的科学依据及理论参考.