马铃薯钾离子通道蛋白SKT1的原核表达与纯化

Zi-yi ZHANG,Yang LI,Jin-lian WANG, Yao-lan WEI,Xiao-dong HAN

Acta Scientiarum Naturalium Universitatis Neimongol（2017）

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摘要

克隆马铃薯(Solanum tuberosum L.)钾离子通道蛋白SKT1基因片段后原核表达并纯化SKT1蛋白,为进一步研究SKT1的晶体结构与功能,以及与其它钾离子通道蛋白的相互作用奠定基础.以马铃薯试管苗总RNA反转录出的cDNA为模板,PCR扩增SKT1蛋白的胞内区,基因片段为1758bp,构建原核表达载体pET30-SKT1,转化大肠杆菌BL21表达株菌,IPTG诱导表达.经SDS-PAGE检测发现SKT1蛋白主要是以包涵体的形式存在.利用6M盐酸胍对SKT1包涵体进行溶解,利用Ni柱亲和纯化,最后在复性缓冲液中复性.获得了SKT1蛋白,复性得率大于40％,纯度达到95％以上,Western Blotting鉴定正确.

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关键词

potato,potassium channel protein,prokaryotic expression system,inclusion body

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