耻垢分枝杆菌烯酰辅酶A水合酶编码基因表达分析及其敲除质粒的构建

胆固醇是某些病原菌胞内生存所必需的碳源和能源物质,而胆固醇的各种代谢酶是潜在的药物作用靶点.烯酰辅酶A水合酶主要参与了脂肪酸的β-氧化循环,但其在胆固醇降解中的作用机理尚不完全清楚.首先对耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis MC2 155)进行了全基因组搜索,获得了18个烯酰辅酶A水合酶的候选基因.对在不同甾醇类化合物条件下的转录组测序结果进行了分析,发现18个候选基因差异表达明显,其中位于胆固醇降解基因簇中的MSMEG_5915(echA19),在胆固醇条件下表达明显上调,MSMEG_5915(echA19)可能参与了胆固醇的侧链降解.最后,构建了MSMEG_5915的敲除质粒,并对耻垢分枝杆菌进行了基因转化.经PCR快速分子鉴定,MSMEG_5915基因被同源整合于耻垢分枝杆菌染色体上.为进一步揭示MSMEG_5915(echA19)基因的功能奠定了基础.