GATA-3启动子报告基因载体构建及其活性鉴定

目的：转录因子G A TA-3在人乳腺癌的发生发展中扮演重要的角色，研究其转录调控有重要意义。方法从人乳腺癌细胞系M CF-7提取基因组DNA 为模板，以PCR 方法扩增获得GATA-3启动子序列，将片段克隆到pGL3-Basic载体内，鉴定后通过报告基因检测系统检测G A TA-3启动子报告基因的荧光素酶活性。结果双酶切、基因测序鉴定结果显示，成功构建了GATA-3启动子报告基因，并在M CF-7细胞内鉴定了其具有荧光素酶的表达活性。结论本实验成功构建了GATA-3启动子报告基因载体pG L 3-GATA-3pro-L uc，为后续GATA-3在乳腺癌中表达及其调控通路以及以GATA-3为靶标的抗肿瘤药物研究提供了有效工具。