基于酶辅助循环放大和银纳米簇技术构建荧光传感器用于MicroRNA的检测

基于双链特异性核酸酶(Duplex-specific nuclease,DSN)选择性切割DNA单链和DNA保护的银纳米簇的特性,建立了一种新型的荧光传感器用于MicroRNA(MiR-21)的高灵敏检测.当MiR-21存在时,与Cp杂交形成DNA/RNA双链结构,此时在DSN的水解下,释放出探针DNA部分片段和完整的MiR-21.释放出来的MiR-21可再次发生与Cp杂交、DSN酶切等反应,如此反复,可实现一条MiR-21分子与多条探针杂交、酶切的循环过程.经磁分离,上清液中的探针DNA部分片段与Ag+结合并在硼氢化钠(NaBH4)的还原下产生银簇,检测到较强的荧光信号.相反,当MiR-21不存在时,DSN对单链探针无酶切作用,不能水解Cp,经磁分离,上清液中检测不到荧光信号.在最佳条件下,该传感器检测MiR-21的线性范围为50 fmol/L～10 pmol/L,检测限达6 fmol/L,而且具有较好的选择性,有望用于临床实际样本中微量MiR-21的检测.