水产品中荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens) RT-LAMP可视化检测方法的建立及应用

荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)在低温储存的水产品中仍能存活并繁殖,是导致水产品品质下降和恶化的主要原因.因此开发一种快速高效的检测手段显得尤为迫切.本文将逆转录-环介导等温扩增(Reverse Transcription Loop-mediated Isothermal Amplification,RT-LAMP)技术与可视化检测手段结合,通过条件优化,确定了最佳反应温度(63℃),反应时间(60 min)和最适的Mg2+(2.5 mmol/L)添加量,建立了快速、高效、灵敏的RT-LAMP检测方法.灵敏度检测表明:本方法最低检出限为5.4 copies/反应,比PCR检测方法高200倍.该方法结合SYBR-Green Ⅰ染色,通过目测就可以直接鉴别荧光假单胞菌,使得检测结果更加直观,简便可行.