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细菌CRISPR/Cas免疫系统的构建及功能鉴定

Wu-gao LIU,You-fa DING,Ai-xia LIU, Li-li HUANG,Jing JIN,Jin-mei LI,Wei WANG

Chinese Journal of Microecology（2015）

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Abstract
目的 构建细菌CRISPR/Cas免疫系统表达质粒,用于细菌耐药基因水平转移的研究.方法 PCR技术分三段扩增嗜热链球菌LMD-9的CRISPR/Cas基因序列,并依次接入PACYCDuet-1质粒.以体外酶切效率评价其活性.结果 经PCR扩增、测序鉴定,成功扩增了完整的CRISPR/Cas系统;在功能活性鉴定中,gRNA剪切靶点DNA酶切条带的灰度值分别为10和3,表明构建的CRISPR/Cas系统质粒具有活性.结论 成功构建了细菌CRISPR/Cas免疫系统质粒,为今后用于细菌耐药基因水平转移打下了基础.
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Key words
CRISPR/Cas9 system,Plasmid,Bacteria
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