水稻arf1基因3'-UTR片段的克隆和验证

终止子是一段位于基因编码之后的序列,作为一种调控信号调控DNA的转录终止和RNA的释放,在基因工程技术应用中通常被构建在目的基因下游,用以调控基因的转录和表达.现有常用的终止子很少,克隆和验证新的终止子是植物基因工程技术发展的需要.通过生物信息学分析和Realtime-PCR表达验证,筛选出候选基因腺苷酸核糖基化作用因子(Similar to ADP-ribosylation factorl,arf1)基因,克隆了水稻arf1基因3'-UTR.结果显示,所克隆3'-UTR片段含有8个多聚信号元件和4个UE片段.将3'-UTR与gus基因融合后分别与玉米泛素启动子Ubiquitin和花椰菜花叶病毒(CaMV)启动子35S连接构建植物表达载体验证3'-UTR调控表达效果.烟草瞬时表达显示3'-UTR融合的gus基因在35S和Ubi启动子驱动下,在烟草叶片中能正常表达;3'-UTR调控下的gus基因在水稻根、茎、叶、花和种子中均可稳定表达,且表达量与T-Nos终止子相当.本研究表明所克隆的3'-UTR可替代T-nos终止子,可为植物基因工程技术的应用提供新的调控元件.