嗜热自养甲烷杆菌二硫键异构酶活性位点特征

嗜热自养甲烷杆菌二硫键异构酶(MtPDI)催化蛋白质二硫键的形成和异构化,具有分子伴侣活性,在宿主热损伤保护中具有关键性作用.为研究MtPDI活性结构域中的关键氨基酸位点,通过生物信息学预测MtPDI的活性结构域(C74PAC77),通过定点突变分析其对二硫键异构酶酶活性的影响.结果显示:MtPDI活性结构域中C74、C77位点进行突变后,MtPDI (C74S)、MtPDI (C77S)、MtPDI (C74S/C77S)的还原酶活性都明显降低,分别降低32.2％、40.7％和51.2％,双突变的酶活影响大于单点突变.热处理后,突变体MtPDI (C74S)、MtPDI (C77S)、MtPDI (C74S/C77S)对大肠杆菌的热损伤保护明显低于MtPDI.本研究表明C74和C77是自养甲烷杆菌二硫键异构酶活性区域关键氨基酸,可为深入研究嗜热古菌二硫键的功能和嗜热自养甲烷杆菌抗胁迫机理提供基础.