川西云杉几丁质酶基因PICHI的克隆、表达与生物信息学分析

以川西云杉(Picea likiangensis var.balfouriana(Rehd.et Wils.)Hillier ex Slsvin)为材料,利用RTPCR技术,克隆获得几丁质酶基因PICHI的cDNA全长序列,并对该基因的序列特征及基因表达情况进行分析.结果显示,PICHI的开放阅读框长1017 bp,共编码338个氨基酸;蛋白序列结构域分析结果表明,PICHI为ClassⅠ类几丁质酶,属19家族,兼具溶菌酶活性;该序列与其他植物几丁质酶的蛋白序列相似性较高.系统发育分析结果显示,川西云杉PICHI序列与北美云杉(Picea sitchensis(Bong.)Corr.)、黑松(Pinus thunbergii Parl.)等松科植物亲缘关系最近.进一步将PICHI重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中,表达出约45 kD的蛋白,主要以包涵体形式存在,且在25℃下采用0.2 mmol/L的IPTG诱导4 h时蛋白的表达量最佳.