人星状病毒、肠道腺病毒双重实时荧光RT-PCR方法的建立及应用

人星状病毒(Human astrovirus,HAstV)、肠道腺病毒(Enteric adenovirus,EAdV)是引起急性胃肠炎的两种常见病原体,目前尚未实现这两种病原体荧光定量RT-PCR的单管双重检测.为建立一种灵敏特异的双重荧光定量RT-PCR检测方法并应用于实验室样本检测,本研究选择HAstV、EAdV特异性引物和探针,优化反应体系和反应条件,并对该方法的灵敏性、特异性和稳定性进行评价.结果 显示,该方法针对HAstV和EAdV的检出限分别可以达到522拷贝/μL和53.5拷贝/μL;与多种常见和罕见的人腹泻病毒没有交叉反应;批内和批间等重复性实验变异系数均小于5％;灵敏度高于常规PCR.本研究提示,建立的HAstV、EAdV双重荧光定量RT-PCR检测方法具有较好的灵敏度、特异性和稳定性,可用于实验室HAstV和EAdV的快速筛查.