稳定表达脑心肌炎病毒先导蛋白N2a细胞系的建立与鉴定

为建立稳定表达脑心肌炎病毒先导蛋白的N2a细胞系,本研究应用脂质体介导DNA转染法,将表达脑心肌炎病毒(EMCV)先导(L)蛋白的重组质粒pNTAP-B-L转染至N2a细胞中,通过筛选G418抗性单克隆细胞,建立能够稳定表达融合蛋白TAP tag-L的N2a细胞系;利用免疫印迹试验(Western blotting)和间接免疫荧光试验(IFA)对融合蛋白TAP tag-L的表达及细胞内定位情况进行鉴定检测.结果表明EMCV的L基因已经整合进N2a细胞基因组DNA中且L蛋白在获得的阳性N2a细胞中稳定表达,表达产物TAP tag-L主要分布在细胞浆内.建立的稳定表达L蛋白的N2a细胞系,为进一步研究先导蛋白功能及EMCV感染过程中与宿主细胞(N2a)相互作用蛋白的筛选奠定了基础.