嗜碱芽孢杆菌PB92碱性蛋白酶基因启动子的克隆及应用

利用TAIL-PCR方法从嗜碱芽孢杆菌PB92基因组中扩增出碱性蛋白酶基因上游启动子活性片段,测序分析后登录GenBank(Eu130686).此序列具有多个启动子特征区域,且在-538～-370 bp和-275～-128 bp两个区域存在反向读码框.对启动子片段进行功能缺失的分析结果表明,TSS上游105 bp片段具有明显启动子活性,但以长为414bp-619bp时活性更为显著.此外,对PB92碱性蛋白酶的信号肽分析结果表明,此信号肽具有典型分泌型(See-type)信号肽结构.将PB92碱性蛋白酶基因启动子和信号肽序列克隆入pBE2,构建成表达载体pBEAC,并以其为载体实现了植物甜蛋白monellin基因在枯草芽孢杆菌1A751中的高效表达.