受体相互作用蛋白激酶-3参与甲型流感病毒H1N1感染C57BL/6小鼠诱导特异性CD8+T细胞应答

目的 研究受体相互作用蛋白激酶-3(receptor-interacting protein 3,RIP3)在C57BL/6小鼠感染甲型流感病毒H1N1 PR8后,在特异性CD8+T细胞免疫应答中的作用.方法 用剂量为0.7×103半数组织细胞感染剂量(50％tissue culture infective dose,TCID50)的甲型流感H1N1 PR8病毒株,通过滴鼻方式分别感染RIP3敲除(RIP3-/-)和野生型(WT)的C57BL/6小鼠.在感染后第8天(day post infection,d.p.i)分离小鼠脾细胞,使用流式细胞术(fluorescence-activated cell sorting,FACS)检测流感抗原特异性CD8+T细胞数量及功能:MHC I表位肽四聚体法(tetramer staining)染色流感特异性CD8+T细胞,细胞内细胞因子染色法(intracellular cytokine staining,ICS)检测CD8+T细胞产生IFN-γ、TNF-α、IL-2等效应性细胞因子水平和与CD8+T细胞杀伤功能有关的颗粒酶(granzyme B)的表达情况.结果 0.7×103 TCID50流感病毒感染后,WT小鼠中流感抗原特异性CD8+T细胞比例为RIP3-/-小鼠的2.71倍;WT小鼠中CD8+T细胞分泌细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-2的能力均显著高于RIP3-/-小鼠(P<0.01);且WT小鼠CD8+T表达granzyme B水平显著高于RIP3-/-小鼠(P<0.01).结论 本研究在甲型流感病毒感染的小鼠体内发现敲除RIP3分子可导致流感感染诱导的特异性CD8+T细胞数量减少、功能降低,表明RIP3是参与流感抗原特异性CD8+T细胞的诱生及功能发挥的关键分子之一.