大鼠冠状病毒和仙台病毒的双重PCR检测方法的建立与应用

目的 建立快速检测实验大鼠冠状病毒和仙台病毒的双重PCR方法.方法 根据大鼠冠状病毒N基因、仙台病毒L基因设计特异性引物;经过双重PCR优化,特异性和敏感性的检测,建立双重PCR体系.应用该PCR体系检测人工感染仙台病毒组织DNA样本和实验动物组织样本,并与ELISA方法比对.结果 双重PCR扩增出大鼠冠状病毒(168 bp)和仙台病毒(262 bp)目的条带,PCR扩增产物测序结果利用核酸BLAST功能进行同源序列对比,仙台病毒和大鼠冠状病毒同源性分别为100％和99％.仙台病毒和大鼠冠状病毒的检测下限为1.56×102 copies/μL.特异性检测对小鼠肝炎病毒扩增,产生片段大小近似大鼠冠状病毒产物.应用建立的双重PCR体系检测人工感染仙台病毒组织DNA样本,30份DNA标本均被检出;检测94份实验动物肺组织样本,结果均阴性.结论 建立的双重PCR方法操作简单、快速、特异性强、灵敏度高,能够实现对实验动物仙台病毒和大鼠冠状病毒病原体的快速检测.