RNA 干扰抑制 Beclin1基因对裸鼹鼠成纤维细胞增殖与凋亡的影响

目的：应用RNA干扰技术抑制自噬调控基因Beclin 1的表达，检测Beclin 1表达对裸鼹鼠皮肤成纤维细胞增殖与凋亡的影响以及p53、BAX、Bcl2等基因表达的影响。方法分别检测裸鼹鼠成纤维细胞经饥饿、H2 O2刺激等处理后Beclin 1的表达，然后采用设计的Beclin l基因的干扰RNA及阴性对照分别瞬时转染裸鼹鼠成纤维细胞。采用real－time PCR及Western blot法检测沉默效果后，采用CCK－1实验检测沉默后细胞增殖活性，流式细胞仪检测细胞凋亡情况，然后采用Western blot检测相关基因蛋白表达水平。结果饥饿与H2 O2刺激均能导致Beclin 1表达水平的改变。采用gene expresso转染试剂对裸鼹鼠皮肤成纤维细胞转染效率可达到90％以上，re－al－time PCR及Western blot结果显示所设计的Beclin 1 siRNA可有效降低Beclin 1的表达。 Beclin 1基因沉默后，裸鼹鼠皮肤成纤维细胞增殖抑制率均显著高于对照组，细胞早期凋亡与晚期凋亡率均显著升高，同时p53、BAX、Bcl2、LC3B、p－AKT、mTOR等表达量下降。结论 Beclin 1在裸鼹鼠成纤维细胞抵抗饥饿、H2 O2刺激等过程中表达量显著变化，同时抑制Beclin 1的表达，可抑制裸鼹鼠细胞增殖，促进其凋亡，这提示Beclin 1基因对裸鼹鼠自噬、增殖、凋亡起到调控作用。