苏云金芽胞杆菌CcpA蛋白对几丁质酶基因chiA和chiB的表达调控作用

[目的]研究苏云金芽胞杆菌Bti75中糖代谢蛋白CcpA对两种几丁质酶基因chiA和chiB的表达调控.[方法]利用PREDetector软件分析Bti75chiA和chiB的基因上游区序列,EMSA方法在体外验证CcpA是否能与chiA和chiB基因的启动子区域片段特异性结合.构建ccpA基因敲除载体以获得敲除突变株△ccpA,运用实时荧光定量PCR技术和Westem blot技术比较有无葡萄糖存在的情况下,CcpA对chiA和chiB基因表达的影响.[结果]计算机分析显示,chiB上游启动子区存在一个潜在的CcpA结合位点crechiB,而chiA上游启动子区未发现类似序列.体外实验表明,CcpA蛋白在共阻遏蛋白Hpr-Ser45-P的参与下可与chiB基因启动子区特异性结合,而与chiA基因启动子区没有特异性结合;实时荧光定量PCR和Western blot结果均显示,Bti75中ccpA基因敲除后,同样在葡萄糖存在下chiB的表达量提高而chiA的表达量变化不明显.[结论]在葡萄糖存在的情况下,CcpA蛋白能抑制苏云金芽胞杆菌中几丁质酶chiB的表达,而chiA的表达不受CcpA调控.