光滑鳖甲抗菌肽的原核表达条件优化及其抗菌活性

[目的]本研究旨在探索光滑鳖甲Anatolica polita borealis抗菌肽ApAMP1015的最佳原核表达条件及其抗菌活性.[方法]利用生物信息学方法对得到的ApAMP1015基因序列和蛋白结构进行分析,运用原核表达技术表达TrxA-ApAMP1015融合蛋白,通过Western blot方法鉴定蛋白,并利用亲和层析的方法获得纯化的TrxA-ApAMP1015融合蛋白,抑菌圈实验验证蛋白抗菌活性.[结果]克隆得到光滑鳖甲抗菌肽基因ApAMP1015,其开放阅读框长387 bp,编码128个氨基酸,其中包含由19个氨基酸组成的信号肽和75个氨基酸组成的成熟肽.NCBI数据库同源序列比对结果显示该蛋白属Coleoptericin抗菌肽家族.确定了蛋白表达的最佳条件:0.1 mmol/L IPTG 150 r/min 25℃诱导4h.肠激酶切割后的ApAMP1015能够有效抑制大肠杆菌Escherichia coli的生长.[结论]克隆得到光滑鳖甲抗菌肽基因ApAMP1015,获得了其编码蛋白的最优表达条件,研究发现ApAMP1015能够有效抑制大肠杆菌的生长.本研究为光滑鳖甲抗菌肽ApAMP1015的应用和进一步研究奠定了基础.