朱砂叶螨几丁质合成酶基因1全长cDNA的克隆与表达分析

【目的】克隆朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus几丁质合成过程中的关键酶几丁质合成酶基因，并检测该基因在朱砂叶螨生长发育不同阶段的相对表达量。【方法】本研究采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）以及 cDNA 末端快速扩增（RACE）技术首次克隆获得朱砂叶螨几丁质合成酶基因1的全长cDNA序列（命名为TcCHS1，GenBank登录号为KM242062），并使用实时荧光定量PCR技术首次检测了TcCHS1基因在朱砂叶螨生长发育不同阶段的相对表达量。【结果】朱砂叶螨TcCHS1基因的cDNA全长为4881 bp，包括198 bp 的5￠非翻译区（5￠-UTR），4425 bp的开放阅读框（ORF），258 bp的3￠非翻译区（3￠-UTR），开放阅读框编码1474个氨基酸，预测其蛋白质分子质量约为168.35 ku，理论等电点为6.26。其包含EDR和QRRRW这2个几丁质合成酶基因的标签序列。氨基酸序列同源性分析结果表明：TcCHS1与其他昆虫该基因编码蛋白的氨基酸序列相似度在50%左右，与二斑叶螨Tetranychus urticae的氨基酸相似度最高（98%），与西方盲走螨 Metaseiulus occidentalis 的相似度为55%。分子系统进化的结果也表明TcCHS1与其他昆虫的CHS1聚在一起，并且和二斑叶螨具有最近的亲缘关系。荧光定量分析表明TcCHS1基因在朱砂叶螨生长发育的不同阶段（卵、幼螨、第1若螨、第2若螨、雌成螨和雄成螨）均有表达，在卵和雌成螨中的表达量较高，在第2若螨的表达量最低。【结论】 TcCHS1基因可能在朱砂叶螨生长发育过程中具有重要作用。