甲基转移酶样蛋白3(METTL3)通过NF-κB信号通路促进小鼠巨噬细胞活化和炎症反应

目的 研究参与腺嘌呤第6位氮原子上的甲基化修饰(m6A)的甲基转移酶样蛋白3(METTL3)在巨噬细胞活化中的作用.方法 体外培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,并以1μg/mL脂多糖(LPS)刺激0、2、4、6h,检测METTL3的表达情况.设计合成的针对小鼠METTL3的小干扰RNA(siRNA)敲低METTL3的表达,通过实时定量PCR和Western blot法检测干扰效率;利用siRNA下调METTL3表达48 h后,以1μg/mLLPS刺激RAW264.7细胞,采用实时定量PCR检测白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-12、IL-1β的mRNA水平,Western blot法检测核因子κB (NF-κB)信号通路中p65和磷酸化p65蛋白水平.结果 LPS刺激后RAW264.7细胞METTL3的表达上调,设计合成的METTL3 siRNA能有效敲低METTL3的水平.敲低METTL3后,巨噬细胞LPS刺激诱导表达的IL-6、IL-12、TNF-α和IL-1β显著降低,同时伴有NF-κB信号通路p65蛋白的磷酸化水平降低.结论 METTL3通过激活NF-κB信号通路促进LPS刺激的巨噬细胞活化和炎症反应.