变应性鼻炎IgE高亲和力可溶型Fc段受体1α(sFcε1α)蛋白的制备及血清中相应抗体的检测

目的 构建人可溶型Fc段受体1α(sFcεR1α)的原核表达载体,诱导表达并纯化重组FcεR1α胞外区段蛋白,检测其与血清中IgE的结合力及相应抗体的含量.方法 应用巢式PCR技术获得人FcεR1α胞外区段基因,构建原核表达载体pET-sFcε1α,最佳诱导条件表达出sFcεR1α,采用亚胺二乙酸His标签纯化树脂纯化并进行Western blot法鉴定.ELISA检测人sFcεR1α与血清中IgE的结合力及血清中sFcεR1α总量、sFcεR1 α-IgE及抗FcεR1α自身抗体的含量.结果 扩增出人FcεR1α胞外区段基因,大小为600 bp左右.pET-sFcεR1α经PCR、双酶切、测序鉴定正确.诱导表达、纯化出人sFcεR1α,相对分子质量(Mr)大小约为42000.Western blot法鉴定为人sFcεR1α.人sFcεR1α可以与人血清中IgE结合.变应性鼻炎(AR)患者血清中sFcεR1α总量、sFcεR1 α-IgE含量均低于正常人,抗FcεR1α抗体含量高于正常人.结论 获得人sFcεR1α,sFcεR1α与人血清中IgE有较强的结合力,AR患者血清中sFcεR1α总量、sFcεR1α-IgE含量均低于正常人,抗FcεR1α抗体含量高于正常人.