重组幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位的高效表达及其初步纯化

JOURNAL OF CELLULAR AND MOLECULAR IMMUNOLOGY（2002）

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Abstract

目的在大肠杆菌中高效表达幽门螺杆菌的热休克蛋白A基因(hspA), 并对其初步纯化.方法用巢式PCR扩增hspA基因.经测序证实后, 克隆于表达载体pIM-1中, 转化大肠杆菌.以SDS-PAGE和免疫印迹分析目的蛋白的表达, 并测定N-端氨基酸的序列.采用固相镍离子亲和层析, 对重组hspA进行初步纯化.结果扩增的hspA基因为357 bp, 并在大肠杆菌中得到高效可溶性表达.重组蛋白的表达量最高可达细菌总蛋白的60.5%.免疫印迹及氨基酸测序结果证实, 表达产物为幽门螺杆菌hspA亚单位.固相镍离子亲和层析初步纯化的重组HspA的纯度为87.8%.结论 hspA亚单位的高效表达与初步纯化, 为批量获得Hp亚单位抗原打下了基础.

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