用EBV转化的大肠癌患者B细胞构建噬菌体抗体库

目的构建全人源化的噬菌体抗体库。方法采用EBV转化技术，ELISA技术，PCR技术，噬菌体表面呈现技术。结果 EBV转化8例大肠癌患者PBMC，其中七例有抗大肠癌抗体产生，多次PCR扩增出5种VH(γ,μ)和9种VL(к,λ)基因，经简并组合成15种ScFv基因。在体外与表达载体fUSE5连接，电导入大肠杆菌MC1061，经四环素 抗性筛选，得到库容为1.1×107的初级噬菌体抗体库。全长ScFv基因的插入率为70％。结论应用EBV转化技术联合噬菌体抗体库技术，制备全人源化的抗肿瘤单链抗体(ScFv)，这一策略是完全可行的。