单增李斯特菌prsA1基因的截短表达、纯化及多克隆抗体的制备

单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)是一种常见的食源性致病菌,能够引发李斯特菌病,对食品安全构成巨大威胁.prsA1具有保守性和特异性,利用SignalP 4.1 Server程序、TMHMM Server V.2.0程序和SEPPA 2.0程序预测了PrsA1的信号肽段、跨膜区域及空间抗原表位,预测结果显示PrsA1的N端含有信号肽段及跨膜区且该蛋白具有良好抗原表位结构,因而可作为检测靶标.在此基础上,采用PCR法获得prsA1的非跨膜区序列即△84prsA1,构建重组质粒pET30a-△84prsA1并转入到大肠杆菌中诱导表达△28PrsA1,Ni-IDA柱亲和纯化重组蛋白△28PrsA1,以纯化的△28PrsA1为抗原制备多克隆抗体.间接ELISA检测多克隆抗体的效价,高达1:128 000.Western blotting分析结果显示该多克隆抗体能够识别从单增李斯特菌中提取的PrsA1蛋白.利用生物信息学筛选检测靶标并分析抗原表位结构,最后成功制备了多克隆抗体,为单增李斯特菌检测靶标的筛选和免疫学检测提供了实践基础.