肠出血性大肠杆菌O157∶H7紧密黏附素免疫保护性片段的基因克隆与表达

目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7紧密黏附素(intimin)免疫保护性片段(intiminC300). 方法设计引物采用PCR法自EHEC O157∶H7基因组扩增紧密黏附素及其免疫保护性片段的编码基因eae与eaeC300,T-A克隆后构建原核表达质粒pET-28a(+)-eae及pET-28a(+)-eaeC300,经测序鉴定后转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,PAGE检测. 结果 PCR法自EHEC O157∶H7基因组扩增出了约2800 bp和900 bp的目的片段;原核表达质粒pET-28a(+)-eae及pET-28a(+)-eaeC300经酶切及测序鉴定与预期序列一致.转化E.coli BL21(DE3)后IPTG诱导目的蛋白表达率约25%和30%;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约96×103和35×103,破菌后电泳证实目的蛋白均以包涵体形式表达. 结论 EHEC O157∶H7紧密黏附素免疫保护性片段经基因克隆后获得了较高的表达量,为进一步的生物学性质及免疫学特性研究奠定了基础.