高通量测序分析实验性脑脊髓炎肠道微生物变化及与IL-17、IFN-γ相关性

[目的]通过建立实验性脑脊髓膜炎(EAE)小鼠模型,观察小鼠肠道菌群在不同发病时间点的变化和炎症因子IL-17、IFN-γ的表达情况,探讨肠道菌群的变化在EAE发病中的免疫调节作用.[方法]将48只C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为正常对照组、EAE模型组各24只.EAE组采用MOG35-55与完全弗氏佐剂的混合物制备模型,进行神经功能评分,记录体重变化.分别取免疫后7、14、21、30 d的小鼠粪便,对样本DNA的16S rDNA V3/V4区基因测序.ELASE法检测IL-17、IFN-γ的表达.[结果]EAE组小鼠血液中IL-17、IFN-γ的表达从第7天开始逐渐升高,21 d时达到高峰.14 d时,EAE组与正常对照组相比,物种丰度有显著性差异(P＜0.05)的菌种有:Alistipes、布牢特氏菌属、毛螺菌科NK4A 13 6_group等.30 d EAE组与正常对照组相比,物种丰度有显著性差异(P＜0.05)的菌种有:Allobaculum、真细菌属、螺杆菌等.通过LefSe分析,在7、14、21d中分别主要作用的微生物菌种逐渐减少,在21 d时最少.Odoribacter在21 d时起了主要作用.[结论]与正常对照组相比,14、21、30 d EAE小鼠肠道菌种的丰度均发生了变化,产生了肠道菌群的紊乱;其中普雷沃氏菌属NK3B31_group的丰度均较正常对照组降低,与IFN-γ呈负相关(r=-0.537,P＜0.01).普雷沃氏菌属NK3B31_group可能是导致MS脱髓鞘发生的关键菌属.EAE组各个时间点相比起主要作用的肠道菌群种类减少,多样性降低.其中,Odoribacter是在21 d高峰期起主要作用的菌种,但其作用机制需要深入研究.EAE组中炎症因子IL-17、IFN-γ表达的升高,促进了MOG35-55诱发的炎症反应.