重组酶聚合酶扩增技术快速检测鳗利斯顿氏菌

鳗利斯顿氏菌Listonella anguillarum)是一种常见的病原体,能感染多种养殖动物,每年给水产养殖业带来巨大的经济损失.随着集约化养殖模式在水产养殖业的大规模应用,水产病原体的传播速度也大幅度提高.为此,迫切需要建立一种快速、准确的检测技术.本研究以鳗利斯顿氏菌的金属蛋白酶基因(zinc metalloprotease gene,empA)为靶基因,设计多对引物和l条exo探针,通过优化反应体系和条件,建立了一种基于重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术的快速实时检测鳗利斯顿氏菌的方法.结果表明,建立的Real-time RPA检测技术能够在20 min内特异地检测出鳗利斯顿氏菌,与其他7种常见水产致病菌均不发生交叉反应.该检测方法最低能够检测出1 pg/μL鳗利斯顿氏菌基因组模板,对人工污染的样品最低检测限为3.4×102 CFU/mL,且重复性良好.因此,利用本研究建立的Real-time RPA检测技术,能特异、准确、高效地检测出鳗利斯顿氏菌,而且操作简单、耗时短,为水产养殖中鳗利斯顿氏菌的快速诊断及商业试剂盒的开发提供科学依据和技术参考.