共表达H5亚型AIV HA基因和IBDV VP2基因重组DEV的构建及免疫效力评价

禽流感(Avian influenza,AI)和传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)严重危害家禽养殖业,疫苗免疫是防治的主要手段之一.为探索以鸭瘟病毒(Duck enteritis virus,DEV)(又称鸭病毒性肠炎病毒)为载体,研制在鸡(Gallus gallus)中使用的AI-IBD二联疫苗的可行性,本研究利用overlap PCR及Gateway LR克隆技术,扩增出血凝素(hemagglutinin,HA)-内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)-病毒蛋白2(virus protein 2,VP2)和VP2-IRES-HA基因片段,并将其克隆入DEV多片段拯救系统T-us78Kan ccdB粘粒短独特区7(unique short region 7,us7)和US8位点之间,利用该系统成功拯救出两株共表达H5亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV) HA基因和传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV) VP2基因的重组病毒rDEV-HA/VP2和rDEV-VP2/HA,并对其进行了初步免疫效果评价.经系统体外实验表明,病毒传至20代,外源基因均能在重组病毒中稳定遗传和表达,且不影响载体病毒的增殖.但免疫效力实验显示,重组病毒以103半数组织培养感染剂量(tissue culture infective dose,TCID50)、104 TCID50、1050 TCID50免疫鸡后14 d,rDEV-HA/VP2最高仅诱导对同源AIV强毒70%的免疫保护和对超强IBDV(very virulent IBDV,vvIBDV) 30%的免疫保护,部分鸡中能检测到血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)抗体,但整体水平较低,IBD抗体未检测到;rDEV-VP2/HA最高仅诱导对vvIBDV 40%的免疫保护,不能诱导对同源AIV强毒的免疫保护,HI抗体和IBD抗体均未检测到.结果显示,以IRES串联基因构建鸭瘟载体禽流感传染性法氏囊病二联疫苗的策略不可行.本研究为以DEV为载体构建在鸡中使用的多联疫苗的研究提供参考资料.