一种高效的苹果茎沟病毒(ASGV)TaqMan探针实时荧光定量(qRT-PCR)检测方法

为建立一种检测苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)的TaqMan探针实时荧光定量PCR(quantitative Real-time RT-PCR,qRT-PCR)方法,本研究根据ASGV外壳蛋白(coat protein,CP)基因保守序列设计了特异性引物和TaqMan探针,以构建的ASGV-cp重组质粒为阳性标准品绘制标准曲线,并对该方法的特异性、灵敏性和重复性进行检验.建立的标准曲线相关系数达0.999,扩增效率为96.8％;该方法特异性好,与苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV)、苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)、苹果锈果类病毒(Apple scar skin viroid,ASSVd)均无交叉反应;灵敏度为10拷贝/μL,比常规RT-PCR高1 000倍;批内和批间变异系数均＜1％.表明该方法具有特异性强、灵敏高和重复性好的优点,适用于实际样品中ASGV的快速准确检测.