构建食品级植酸酶黑曲霉工程菌

植酸是植物种子中肌醇和磷的主要存在形式,由于单胃动物体内缺乏能分解植酸的酶,以植酸磷形式存在的磷难以被单胃动物吸收.植酸酶作为饲料添加剂已经广泛应用,但在食品中的应用研究刚刚开始.本研究以黑曲霉(Aspergillus niger)CICC2 462基因组DNA为模板,PCR扩增植酸酶基因片段,并在其两端加上糖化酶基因(glaA)的5'同源臂和3'同源臂,构建农杆菌Ti质粒基因置换载体pSZHG-phy.通过农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法转化黑曲霉,筛选以植酸酶基因替换糖化酶基因的同源重组转化子,以实现植酸酶基因的高效表达.结果表明,筛选获得4株同源重组转化子,同源重组率为100％,通过分光光度计法测定重组植酸酶菌株的最高发酵酶活为316.2 U/mL,为出发菌株的20.8倍,证明植酸酶phy基因是可以在黑曲霉糖化酶生产菌中实现高效表达.本研究为进一步构建食品级植酸酶工程菌提供了基础资料.