上皮细胞来源的外泌体通过TLR/MyD88信号通路促进BCG诱导的巨噬细胞的炎症反应

目的 探究上皮细胞来源的外泌体在BCG(卡介苗)感染巨噬细胞产生炎性反应中的调控作用.方法 本研究通过试剂盒提取经BCG感染及未感染的人正常上皮细胞中的外泌体并对其进行鉴定;将用染料标记的外泌体与巨噬细胞共孵育观察与巨噬细胞的作用过程;ELISA方法检测外泌体刺激后巨噬细胞上清中炎性因子IL-6、IL-1β的含量;蛋白免疫印迹法检测巨噬细胞中TLR2、TLR4、TLR6、MyD88、NF-κB及TRAF6蛋白的表达.结果 纯化获得的外泌体在电镜下呈茶托状,大小在30～100 nm;并表达外泌体的表面分子标志CD9、HSP70;DIR红色染料标记的外泌体被巨噬细胞吞噬进入胞内;经外泌体刺激能够显著增加巨噬细胞分泌的炎性因子IL-6、IL-1β(P＜0.001);且与BCG单独处理组比较,无论BCG预处理上皮细胞或未处理的外泌体都能进一步升高BCG诱导的巨噬细胞分泌炎性因子水平(P＜0.05);同时TLR信号TLR2、TLR4、TLR6以及MyD88、NF-κB、TRAF6蛋白在巨噬细胞受外泌体刺激后表达均显著上调(P＜0.05).结论 上皮细胞来源的外泌体通过激活TLR/MyD88依赖性信号通路调控BCG感染诱导的巨噬细胞炎症反应.