UCP2通过调控mTOR对LPS诱导的HK2细胞自噬产生影响

目的 探讨线粒体解耦联蛋白2 (uncouplingprotein2,UCP2)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导肾小管上皮细胞(HK2细胞)自噬中的作用机制.方法 以HK2细胞为研究对象,采用不同质量浓度LPS(0,0.1,0.5,1,5μg/ml)干预不同时间(0,12,24,48 h),Western blot检测HK2细胞UCP2蛋白水平变化.并将HK2细胞分为4组:正常对照组,LPS组(LPS induced),UCP2shRNA组(UCP2 shRNA+LPS)和UCP2 scramble组(UCP2 scramble+LPS),LPS为1μg/ml,24h.利用Real-time PCR和Western blot检测HK2细胞UCP2 mRNA和蛋白表达水平,免疫荧光检测线粒体动力相关蛋白1(Drp1)表达变化,Western blot检测线粒体融合蛋白2(Mfn2)、Drp1,自噬相关蛋白Beclin-1、LC3B,凋亡相关蛋白Bcl-2、Cleaved-Caspase-3以及mTOR的蛋白表达水平.结果 Western blot结果显示,1 μg/ml LPS处理的HK2细胞,在12h和24 h UCP2蛋白的水平较对照组明显增加(P＜0.05);0.1,0.5和1 μg/ml的LPS刺激24h,UCP2水平与对照组相比逐渐增加.使用1μg/ml的IPS刺激24h,免疫荧光和Western blot发现,UCP2,Drp1较对照组明显增加,Mfn2表达减少(P＜.05),而转染UCP2 shRNA后,可显著抑制UCP2,Drp1水平的增加以及Mfn2水平的降低(P＜0.05).同时,Western blot发现LPS组自噬相关蛋白Beclin-1,LC3B,促凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase-3明显增加(P＜0.05),抗凋亡相关蛋白Bcl-2水平降低(P＜0.05),而转染UCP2 shRNA后,Beclin-1,LC3B,Bcl-2表达水平降低,Cleaved-Caspase-3水平进一步增加(P＜0.05).Western blot结果显示转染UCP2 shRNA组p-mTOR水平较正常组和LPS组明显增加(P＜0.05);而mTOR蛋白水平各组间无统计学差异(P＞0.05).结论 UCP2在LPS诱导的HK2细胞损伤中通过自噬发挥保护作用.