TREM-1促进巨噬细胞的迁移并参与脂多糖诱导的小鼠心肌功能障碍

目的 探讨髓系细胞触发受体-l(triggering receptor expressed oil myeloid cells-1,TREM-1)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠心肌功能障碍的作用以及对巨噬细胞RAW264.7迁移的影响.方法 将健康C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组、LPS组、LPS+LP17组、LPS+TAK-242组并进行相应处理,6h后超声心电图检测小鼠心功能指标,12h取心肌组织HE染色观察病理改变,免疫组化染色观察巨噬细胞表面分子F4/80阳性表达,ELISA检测血清中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β及IFN-γ的表达情况,实时荧光定量PCR检测TREM-1、BNP以及炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ的mRNA水平;培养巨噬细胞RAW264.7,将细胞随机分为正常组、LPS组、LP17+LPS组、TAK-242+LPS组并进行对应处理,实时荧光定量PCR检测TREM-1与TLR4的mRNA水平,ELISA检测细胞培养液中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β及IFN-γ的表达情况,Transwell小室观测RAW264.7细胞迁移情况,蛋白免疫印迹检测RAW264.7中TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白水平.结果 与对照组相比,超声心电图检测结果显示LPS组小鼠的EF与FS下降,LVD增大,IVS减小,LVPW变薄,变化均显著(P＜0.05),实时荧光定量PCR结果显示TREM-1 mRNA与BNP mRNA表达水平上升(P＜0.05),免疫组化染色法显示F4/80有大量阳性表达(P＜0.01),ELISA检测显示炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ的含量增加(P＜0.05),实时荧光定量PCR检测也表明这些炎性因子mRNA水平升高(P＜0.05);与LPS组小鼠相比,注射TREM-1抑制剂LP17使EF、FS上升,有效抑制了LVD增大、IVS减小以及LVPW变薄的现象(P＜0.05),TREM-1mRNA与BNP mRNA表达水平均降低(P＜0.05),心肌损伤减轻,F4/80阳性表达减少(P＜0.01),炎症因子水平也明显下降(P＜0.05),与注射TLR4抑制剂TAK-242的效果一致.与对照组相比,LPS诱导RAW264.7细胞后,细胞中TREM-1 mRNA与TLR4 mRNA水平升高(P＜0.05),炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ的含量增加(P＜0.05),细胞大量迁移(P＜0.01),细胞中TLR4、MyD88、NF-κBp65、p-IκBα蛋白水平升高(P＜0.05);与LPS组相比,TREM-1抑制剂LP17预处理后再给予LPS诱导,细胞中TREM-1 mRNA与TLR4 mRNA水平降低(P＜0.05),炎症因子的含量下降(P＜0.05),RAW264.7细胞迁移被抑制(P＜0.01),TLR4、MyD88、NF-κBp65、p-IκBα蛋白水平也明显降低(P＜0.05).结论 给小鼠注射TREM-1抑制剂可有效减轻LPS诱导的心肌功能障碍,抑制RAW264.7细胞TREM-1表达可抑制细胞的迁移,TLR4/NF-κB途径可能参与了这一过程.