柿叶黄酮提取物抑制BV2小胶质细胞活化在体外氧糖剥夺/再灌注损伤模型中发挥抗炎作用的研究

目的 在体外氧糖剥夺/再灌注(oxygen glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)损伤模型中,研究柿叶黄酮提取物(flavonoid components extract from Diopyros Kaki,FLDK)对BV2小胶质细胞活化及炎症因子释放的抑制效应,并初步探讨其可能机制.方法 将BV2小胶质细胞随机分为3组:正常对照组(control组)、氧糖剥夺/再灌注组(OGD/R组)、柿叶黄酮提取物治疗组(OGD/R+FLDK组),以氧糖剥夺3h和再灌注24 h的方法建立OGD/R损伤模型.采用CCK-8法检测细胞活性,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞损伤率,酶联免疫吸附(ELISA)法检测白介素-1α(IL-1α)、白介素-1β (IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎症因子分泌,RT-PCR法检测Toll样受体4(Toll like receptor4,TLR4)、骨髓样分化因子88 (myeloid differentiationfactor 88,MyD88)、核转录因子-κB (nuclear transcription factor-κB,NF-κB)的mRNA水平,Western blot法检测TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达水平及核转录因子-κB抑制蛋白(inhibitor of NF-κB,IκB)磷酸化水平.结果 CCK-8及LDH法结果显示,FLDK可显著减轻OGD/R损伤介导的BV2细胞活性下降及细胞损伤率增加(P＜0.05);ELISA、RT-PCR及Western blot法结果显示,FLDK可显著降低OGD/R损伤介导的BV2小胶质细胞炎症因子释放,TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA及蛋白表达水平,IκB蛋白的磷酸化水平及NF-κB p65核易位(P＜0.05).结论 在体外OGD/R损伤模型中,柿叶黄酮提取物抑制BV2小胶质细胞活化及炎症因子释放发挥抗炎作用的机制可能是通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的激活实现的.