微小RNA-126基因敲减对CD4+T细胞体外功能的影响

目的 研究微小RNA-126 (microRNA-126,miR-126)基因敲减(knock down,KD)后对CD4+T细胞体外功能的影响并探讨其意义.方法 MACS分选miR-126 KD小鼠脾脏CD4+CD62L+T细胞,ConA刺激48 h后,Real-time PCR技术检测细胞内miR-126成熟体表达水平;FACS分别检测CD4+T细胞表面活化分子CD69、CD62L、CD44和增殖相关分子Ki-67,以及细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17表达变化;Annexin V/PI双染色法检测CD4+T细胞的凋亡情况.结果 与野生型(wide-type,WT)小鼠相比,miR-126KD小鼠的CD4+T细胞中miR-126成熟体表达显著下调(P＜0.001);miR-126 KD小鼠CD4+T细胞活化后CD62L的表达比例显著减少(P＜0.01),而CD69、CD44的比例显著增加(P＜0.05);同时Ki-67+的比例也明显增加(P＜0.05);此外,miR-126 KD小鼠CD4+T细胞的INF-γ表达比例显著上调(P＜0.001),IL-4的比例显著下调(P＜0.01),而IL-17的比例没有明显变化(P＞0.05);最后,CD4+T细胞的凋亡比例显著减少(P＜0.05).结论 miR-126基因敲减后CD4+T细胞的活化、增殖和相关细胞因子分泌均明显增强,为后续深入探讨miR-126在免疫应答中的作用及机制提供前期实验基础.