鲍曼不动杆菌外膜蛋白A1S_0115的克隆、表达及免疫保护性研究

目的 构建鲍曼不动杆菌外膜蛋白A1S_0115胞外区(A1S_ 0115A)与GST标签融合表达的原核表达载体,在大肠杆菌XL-1 blue中表达、纯化A1S_0115A蛋白后,进行抗原免疫保护性的初步研究.方法 利用生物信息学技术分析A1S_0115蛋白结构,确定蛋白的胞外区片段,PCR扩增该基因片段后,构建重组表达载体pGEX-6P-2-A1S_0115A,将重组载体转化大肠杆菌XL-1 blue,IPTG诱导表达GST-A1S _0115A融合蛋白,采用GST亲和层析填料纯化并酶切获得A1S_0115A蛋白.利用已建立的Balb/c小鼠鲍曼不动杆菌全身感染模型对该蛋白抗原的免疫保护性进行初步评价.结果 重组质粒经过BamH I和NotⅠ双酶切鉴定、核酸序列测定和IPTG诱导表达及酶切后蛋白的SDS-PAGE分析表明,A1S_ 0115A蛋白胞外区相对分子质量大小约50 000,GST标签相对分子质量大小约26 000,与预期设想符合,目的蛋白纯度在95％以上.用A1S_ 0115A蛋白对小鼠进行2轮次免疫保护性实验及其抗体的被动免疫实验,免疫攻毒后小鼠的保护率分别为50％和55％,被动免疫保护率为45％和50％.结论 成功构建重组表达载体pGEX-6P-2-A1S_0115A,利用大肠杆菌可溶表达系统、GST亲和层析和酶切方法获得了高纯度的A1S_ 0115A蛋白.动物免疫攻毒保护实验结果表明A1S_ 0115A蛋白具有较好的免疫保护性,为研制新型有效的鲍曼不动杆菌疫苗奠定实验基础.