幽门螺杆菌UreB单克隆抗体的制备及尿素酶活性抑制能力的研究

目的制备抗幽门螺杆菌尿素酶B亚单位(UreB)单克隆抗体,并检测其对尿素酶活性的抑制能力.方法以重组UreB蛋白为免疫原,通过杂交瘤技术制备抗UreB单克隆抗体,用ELISA检测mAb的效价、亲和常数;用Western blot检测mAb的特异性.将尿素酶与单克隆抗体预孵育后加入含有尿素和酚红的缓冲液,于550 nm测定单克隆抗体对尿素酶活性的抑制能力.结果得到5株稳定分泌抗UreB的单克隆抗体的杂交瘤细胞:1D5、9E1、 3A2、1D6、 6E6.测定抗体亚型:1D5,9E1, 3A2为IgG1,1D6、6E6为IgG2a,亲和常数分别为4×108、4.6×108、2.8×108、 2×109、3×109 L/mol. Western blot鉴定5种单克隆抗体均能和重组UreB及全菌蛋白中的UreB抗原发生特异性结合,且均不与肠道常见菌发生交叉反应.5株单克隆抗体中只有6E6具有对尿素酶活性的抑制作用,且抑制率与单克隆抗体剂量相关.结论制备了5株稳定分泌抗UreB抗体的杂交瘤细胞株,产生的单克隆抗体效价高且特异性好,其中6E6能抑制尿素酶活性.本研究为探讨尿素酶的作用机制、UreB的纯化及Hp的临床诊断和治疗奠定了基础.