人高迁移率族B1的表达及其多克隆抗体的制备与鉴定

目的以原核表达的人高迁移率族B1(High mobility group box 1,HMGB1)蛋白为免疫原免疫日本大耳白兔,制备其兔多克隆抗体并进行鉴定.方法将人HMGB1 cDNA克隆于原核表达载体pQE-80L并转化大肠杆菌DH5α,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导HMGB1表达,Ni2+-NTA层析纯化后,用其免疫兔.以ELISA检测抗体效价,Western blot鉴定抗体特异性.结果成功表达并纯化了人HMGB1蛋白,纯化后纯度可达96%;ELISA法测定抗体效价为1:25 600;Western blot结果显示所制备的抗体可特异性与人HMGB1蛋白结合.结论成功制备了兔抗人HMGB1多克隆抗体,为进一步研究HMGB1与相关疾病的关系打下了基础.