Marc145细胞源DCP2基因克隆及其X1亚型蛋白高免血清制备

为分析DCP2基因的特点,研究其编码蛋白的生物学功能及其在病毒复制中的作用机制.本试验拟获取Marc145细胞源DCP2基因序列,构建其原核表达质粒,获得重组蛋白,制备高免血清.结果 显示,成功获得了DCP2基因的两种转录变异体编码区,即长度为1 263 bp的X1亚型和1 158 bp的X2亚型,X1亚型基因序列与X2亚型相比,除了第576位碱基A变成G,第613位碱基C变成T,第945～1 049位多出105 bp碱基外,其他地方完全一致.DCP2 X1亚型基因编码氨基酸序列与X2亚型相比,除945～1 049位多出的105bp基因造成的第314～349个氨基酸的位置多出36个氨基酸外,其余完全一致,第576位、第613位碱基的不同并没有造成氨基酸的变化.DCP2X1亚型蛋白二级结构与X2相比,除了多出的36个氨基酸不同外,其余地方也不一样.构建的携带DCP2X1亚型基因的原核表达质粒,诱导表达的蛋白为不可溶性蛋白,纯化后免疫兔子,成功获得了针对DCP2X1亚型原核表达蛋白的兔源高免血清,效价为1∶6 400.本试验成功获得了DCP2基因X1、X2亚型编码区序列,并大量制得X1亚型重组原核表达蛋白及其高免血清,为进一步研究DCP2的生物学功能及其在病毒复制中的作用机制提供了必要材料.